口蹄疫病毒抗体SA-ELISA快速检测方法的建立

为了解决如何对现有方法进行优化创新以建立口蹄疫抗体检测新方法的问题，本研究在基于液相阻断ELISA的基础上进行方法优化，实现快速、灵敏的检测口蹄疫病毒抗体。本研究通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素（HRP-SA）相结合建立新的液相阻断ELISA检测方法（SA-LPBE），在猪，牛、羊血清样品中具有较高的符合率。结合实际情况，判定优化后牛、羊血清抗体效价≥128，猪血清样本≥64时，判定为阳性，与商用检测试剂盒结immunostimulant OK-432果一致。并且经符合率分析，与原试剂盒具有92.3%的符合率，其批内变异系数小于5%，批间变异系数小于10%。该方法改变了原有的需要制备兔抗豚鼠抗血清再标记HRP技术路线，根本SAHA上提高了酶促反应的效率，保证了方法原有敏感性的同时提高了方法的特异性；利用生物素标记抗体与HRP-SA反应迅速、标记原料稳定、检测背景值等优点实现了将液相阻断ELISA试剂盒操作时间需要2 d时间缩短为3 h，解决了原有操作的繁琐、用时过长、操作疲劳、不稳定、易出错等问题。可应用于FMDV抗体检测，为FMCC950供应商MD流行和临床检测提供了技术方法。