目的:以天花粉蛋白(TCS)为定性检测指标,建立快速鉴定天花粉药材真伪的方法。方法:以TCS为免疫抗原分别免疫新西兰大耳兔及Bal b/c雌性小JQ1鼠,收集免疫后的兔血清;通过杂交小鼠骨髓瘤细胞技术制备抗TCS的单克隆抗体。利用多克隆抗体和单克隆抗体建立检测TMedical implicationsCS的双抗夹心酶免疫检测方法,并通过棋盘格法优选最佳反应条件。将所建立的方法实测不同产地天花粉药材及其混伪品,利用药材吸光值(A)与空白对照吸光值(A_0)之比作为药材真伪评判指标。结果:所建立的双抗夹心酶免疫检测方法最佳反应条件为:兔血清稀释倍数为500倍、单克隆抗体浓度为1.0μg/m L、酶标二抗浓度为2μg/m L。通过对真实样品的检测,发现天花粉正品吸光值明显高于混伪品,且正品天花粉A/A_0>2.0,混伪品A/MK-1775体内实验剂量A_0<2.0。结论:所建立的TCS双抗夹心酶免疫检测方法可实现天花粉真伪的快速鉴别,且样品处理简单、检测效率高,具有推广应用价值。