目的:探究人脐带间充质干细胞来源外泌体(huc MSC-EXOs)对肾缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用,明确瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)信号通路在该过程中的重要作用及其调控机制。方法:(1)选取生长良好的3～8代huc MSCs,用DMEM/F12完全培养基(含10%胎牛血清+1%青链霉素)进行培养。待细胞融合度达80%～90%时,更换无血清培养基培养,培养24～48 h后收集细胞上清液,将其置于离心管中,使用超速离心法进行梯度离心提取外泌体,所获得的外泌体经过透射电镜(TEM)、纳米颗粒追踪分析(NTA)、蛋白质印记法(Western blot)检测,完成huc MSC-EXOs鉴定。(2)SPF级健康雄性SD大Sulfamerazine antibiotic鼠30只,体质量220 g～250 g,随机数字表法分为5组,假手术组(S组)、假手术+TRPC6抑制剂SKF96365组(SS组)、肾缺血再灌注组(IRI组)、肾缺血再灌注+外泌体组(EXO组)、外泌体+TRPC6抑制剂SKF96365组(ES组),每组6只。采用夹闭双侧肾蒂45 min,再灌注24 h的方法构建雄性大鼠肾IRI模型。EXO组和ES组在夹闭双侧肾蒂前15 min将20μg外泌体溶液随机注射到左肾的5个部位,其余各组注射等容量PBS;ES组夹闭肾蒂前5 min尾静脉注射TRPC6抑制剂SKF96365 1.5 mg/kg,SS组游离双侧肾蒂前5 min尾静脉注射等量SKF96365。再灌注24 h后处死大鼠,收集大鼠血清、肾组织标本,HE染色后通过光学显微镜观察肾组织病理学改变并进行Paller评分,通过检测血清肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)评价肾功能改变,Western blot检测各组大鼠肾组织坏死性凋亡标志分子受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1、RIPK3和混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)及TRPC6、PARP1的表达水平。结果:(1)外泌体鉴定:TEM观察到所提取huc MSC-EXOs为具有双层质膜的小囊泡,呈茶托型或一侧凹陷的半球形样形态;NTA结果证实提取的外泌体粒径大小范围为30～150nm;Western blot检测外泌体表面标志蛋白CD9、CD63及CD81表达阳性,符合外泌体特征。(2)与S组比较,SS组未见肾组织损伤,Paller评分、Cr和BUN水平正常(selleckP>0.05),IRI组可见明显肾组织损伤,Paller评分、Cr和BUN水平升高,RIPK1、RIPK3、MLKL表达增加,TRPC6、PARP1表达下降(P<0.05);与IRI组比较,EXO组Paller评分、Cr和BUN水平降低,RIPK1、RRoxadustat分子式IPK3、MLKL表达下降,TRPC6、PARP1表达增加(P<0.05);与EXO组比较,ES组Paller评分、Cr和BUN水平升高,RIPK1、RIPK3、MLKL表达增加,TRPC6、PARP1表达下降(P<0.05)。结论:huc MSC-EXOs可减轻大鼠肾IRI所致的坏死性凋亡,其保护机制与TRPC6/PARP1通路激活有关。